胎鼠皮層神經元原代培養

一、背景

    大腦皮層是調節軀體運動的高級中樞。它由初級感覺區、初級運動區和聯合區三部分構成。人類大腦皮層的神經細胞約有140億個，面積約2200平方厘米，主要含有錐體形細胞、梭形細胞和星形細胞（顆粒細胞）及神經纖維。

    體外原代培養神經元作為神經科學研究的有力手段，越來越受到廣大科研工作者的重視。由于神經元是一種高度分化的細胞，動物出生后很少分裂，相對于其它細胞而言，神經元在體外更難以存活和生長。因此，體外培養神經元要求的培養方法和營養條件均較為特殊。

二、實驗步驟

1. 無菌條件下，從懷孕18天的SD 大鼠腹中取出胚胎放入預冷的無鈣、鎂平衡鹽溶液中；

2.在解剖顯微鏡下，分離取出胚胎大腦皮層，除去腦膜，剪碎組織，加入0.125%胰酶-EDTA 消化液后放入 37℃孵箱內消化10 分鐘，期間搖晃一次；

3.去掉上清，加入終止液終止消化，吹打10-15次，不能有氣泡，收集上清；剩余沉淀加入終止液繼續吹打5-10次；

4.所收集的上清過濾后，將細胞懸液于4℃1000rpm離心10min ，棄上清，管內加入新鮮培養液重懸；

5.臺盼藍染色計數，以 3 x 10^4cells/孔種入包被的24孔板，37℃，5%CO2，95%飽和濕度的培養箱中培養；

6.每周換液兩次，每次半量換液。