活力染色技術

一、實驗原理

    各種細胞操作，包括傳代、凍存和原代組織的分離，均能導致細胞死亡。為了確定群體細胞中的存活細胞數，可采用臺盼藍染料排斥實驗（Phillips 1973)。正常的健康細胞能排斥染料，但細胞膜完整性喪失后臺盼藍可彌散入細胞內。染料排斥實驗是一種粗糙的估計細胞活力的方法，無法區別 10%~20% 的活力差異。除此之外，排斥染料的細胞有可能不貼壁或不能較長時問生存或繁殖。

    二、實驗方法

    1) 胰蛋白酶處理細胞，無菌狀態下取 0.5 ml 細胞用 PBS 稀釋至每毫升 2X105~4X105。

    2) 向另一管中無菌加人 0.5 ml 上述細胞稀釋液，并加人 0.5 ml 臺盼藍溶液 (0.4%）

    3) 細胞在染料中停留時間為不短于 3 分鐘、不超過 10 分鐘, 用毛細吸管取含染料的細胞懸液，靠毛吸作用使其進入計數器內。

    4) 至少計數總數 500 個細胞，藍色細胞單獨計數。記錄不排斥染料的藍色細胞的出現頻度。

    5) 根據不排斥染料的細胞數計數細胞的活力百分比。

    例如：單層細胞胰蛋白酶處理后重懸于 5 ml 培養液中, 取 0.5 ml 細胞與 4.5 ml PBS 混勻，吸取 0.5 ml 懸浮于 PBS 中的細胞加于另一小管中，再加人 0.5 ml 臺盼藍溶液混勻。上述懸液加于計數器上，共計數 540 個細胞，62 個細胞不排斥染料呈藍色，活性百分比為 88.5%。