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      細胞凋亡誘導技術(shù)

      更新時間:2022-05-19      點擊次數(shù):3050

      【實驗方法與步驟】

        1)細胞凋亡的誘導:HeLa細胞常規(guī)傳代培養(yǎng)至對數(shù)生長期(見細胞傳代培養(yǎng))。實驗組細胞加入順鉑溶液(生理鹽水配置)至終濃度為20μmo1/L,37℃,5% CO2條件下繼續(xù)培養(yǎng)。空白實驗對照加入等體積的生理鹽水,同樣條件繼續(xù)培養(yǎng)。24h后進行染色及形態(tài)學觀察。

        2)胰酶消化細胞,將培養(yǎng)基上清及消化下來的細胞一同轉(zhuǎn)入離心管中600~800r/min離心10min。

        3)吸去上清,用1mL PBS重懸細胞沉淀,并轉(zhuǎn)入1.5mL微量離心管中,600~800r/min離心10min。

        4)吸去上清,用500μL PBS重量細胞沉淀,取178μL轉(zhuǎn)入0.5mL的微量離心管中,加入PI 20μL(終濃度100μg/mL),Hoechest 33342 2μL(終濃度10μg/mL),混勻,37℃溫箱中避光標記15min

        5600~800r/min離心10min,棄上清,加50μL PBS重懸細胞。

        6)分別從實驗組及對照組中取10μL細胞懸液滴于載玻片上,蓋上蓋玻片。

        7)熒光顯微鏡20倍物鏡在紫外光激發(fā)下觀察,可觀察到凋亡細胞核形態(tài)發(fā)生明顯的改變,出現(xiàn)染色質(zhì)凝集及邊緣化。


        【注意事項】

        1)誘導細胞凋亡后收集細胞時,注意要同時收集細胞培養(yǎng)基上清液。

        2)懸浮細胞時動作要輕柔,避免損傷細胞。

        3)在實驗中可同時設(shè)計壞死細胞的對照,例如,取正常細胞經(jīng)低滲后進行染色觀察。


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