細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)具體步驟及要求如下

　　細(xì)胞培養(yǎng)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)是伊萊博生物的基礎(chǔ)服務(wù)項目之一。

　　細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對于整個生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來說，細(xì)胞培養(yǎng)都是一個*的過程，細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的大規(guī)模克隆。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個細(xì)胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞，這是克隆技術(shù)*的環(huán)節(jié)，而且細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的克隆。通過細(xì)胞培養(yǎng)得到大量的細(xì)胞或其代謝產(chǎn)物。因?yàn)樯锂a(chǎn)品都是從細(xì)胞得來，所以可以說細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是生物技術(shù)中核心、基礎(chǔ)的技術(shù)。

　　細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)的細(xì)胞培養(yǎng)具體步驟和要求以及注意事項：

　　一、復(fù)蘇

　　1、把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動。液體都融化后（大概1-1.5分鐘），拿出來噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺里。

　　2、把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中（用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來），1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

　　3、把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動，使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。

　　4、標(biāo)好細(xì)胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。

　　5、3天換一次培養(yǎng)基。

　　二、傳代

　　1、培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時要傳代。

　　2、把原有培養(yǎng)基吸掉。

　　3、加適當(dāng)?shù)囊鹊癰酶（能覆蓋細(xì)胞就行），消化1-2分鐘。

　　4、細(xì)胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。

　　5、用移液槍吹打細(xì)胞，把細(xì)胞都懸浮起來。

　　6、把細(xì)胞吸到15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

　　7、倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細(xì)胞都吹起來。

　　8、根據(jù)細(xì)胞種類把細(xì)胞傳到幾個培養(yǎng)皿中。一般，癌細(xì)胞分5個，正常細(xì)胞傳3個。繼續(xù)培養(yǎng)。

　　三、凍存

　　把細(xì)胞消化下來并離心（同上）。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細(xì)胞種類，凍存日期。4℃30min，-20℃30min，-80℃過夜，然后放到液氮灌中保存。

　　凍存液的配制：70%的*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。