甲基化檢測的主要方法如下

　　甲基化檢測是一種用于分析和檢測DNA甲基化狀態(tài)的技術(shù)手段，它在生物學和醫(yī)學研究中具有廣泛的應用。DNA甲基化是最早發(fā)現(xiàn)的基因表觀修飾方式之一，它發(fā)生在DNA分子的胞嘧啶堿基上，通過添加甲基基團來調(diào)控基因的表達。甲基化通常發(fā)生在CpG二核苷酸的胞嘧啶5’碳位，形成5’-甲基胞嘧啶。這種修飾方式可以在不改變DNA序列的前提下，實現(xiàn)對基因表達的調(diào)控。甲基化檢測就是通過各種技術(shù)手段來檢測和分析DNA分子上的甲基化狀態(tài)。

　　甲基化檢測的主要方法：

　　1、甲基化特異性的PCR

　　原理：用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，使所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變。隨后設(shè)計針對甲基化和非甲基化序列的特異性引物進行PCR擴增。

　　檢測：通過電泳檢測PCR擴增產(chǎn)物，如果能用針對處理后甲基化DNA鏈的引物得到擴增片段，則說明該位點存在甲基化；反之，則說明被檢測的位點不存在甲基化。

　　2、亞硫酸氫鹽測序法

　　原理：同樣使用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，甲基化的胞嘧啶保持不變。隨后進行PCR擴增，在擴增過程中尿嘧啶全部轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶。最后對PCR產(chǎn)物進行測序，以判斷CpG位點是否發(fā)生甲基化。

　　方法：分為BSP-直接測序法和BSP-克隆測序法。后者將PCR產(chǎn)物克隆至載體后進行測序，以提高測序成功率。

　　3、高分辨率熔解曲線法

　　原理：在非CpG島位置設(shè)計一對針對亞硫酸氫鹽修飾后的DNA雙鏈的引物，這對引物中間的片段包含感興趣的CpG島。若CpG島發(fā)生甲基化，則經(jīng)亞硫酸氫鹽處理和PCR擴增后，樣品中的GC含量發(fā)生改變，從而導致熔解溫度的變化。

　　檢測：通過監(jiān)測熔解溫度的變化來判斷CpG位點的甲基化狀態(tài)。