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以下是肝組織HE服務(wù)相關(guān)的注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2025-07-29      點(diǎn)擊次數(shù):342
  肝組織HE服務(wù)是病理學(xué)診斷中常用的一項(xiàng)關(guān)鍵技術(shù),通過蘇木精-伊紅(HE)染色法對肝組織切片進(jìn)行染色,以清晰顯示細(xì)胞和組織的形態(tài)結(jié)構(gòu),輔助醫(yī)生進(jìn)行疾病診斷和研究。
  該服務(wù)基于HE染色的經(jīng)典原理:蘇木精作為堿性染料,使細(xì)胞核中的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體呈現(xiàn)紫藍(lán)色;伊紅作為酸性染料,使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞間質(zhì)中的成分呈現(xiàn)紅色或粉紅色。通過這兩種染料的結(jié)合,肝組織中的細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)及病理變化得以清晰呈現(xiàn)。
  肝組織HE服務(wù)是病理檢測中常用的技術(shù),用于觀察肝組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)、細(xì)胞排列及病理改變(如炎癥、壞死、纖維化等)。其操作需嚴(yán)格遵循規(guī)范,以確保切片質(zhì)量和診斷準(zhǔn)確性。以下是相關(guān)注意事項(xiàng):
  一、標(biāo)本采集與固定階段
  標(biāo)本采集
  肝組織取材需迅速,避免因缺血、自溶導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞(尤其是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)或手術(shù)標(biāo)本,應(yīng)在離體后30分鐘內(nèi)固定)。
  取材大小適中:通常為1cm×1cm×0.3cm(厚度不超過0.5cm),確保固定液能充分滲透組織,避免中心部位固定不良。
  若為肝穿刺標(biāo)本,需標(biāo)記穿刺方向,避免切片時(shí)遺漏關(guān)鍵區(qū)域;若組織易碎(如肝硬化標(biāo)本),需輕柔操作,防止機(jī)械損傷。
  固定處理
  固定液選擇:使用10%中性福爾馬林(甲醛濃度3.7%~4%,pH 7.0~7.4),固定液體積應(yīng)為組織體積的5~10倍,避免因液體不足導(dǎo)致固定不充分。
  固定時(shí)間:常規(guī)肝組織固定6~24小時(shí)(小型標(biāo)本6~12小時(shí),較大標(biāo)本12~24小時(shí)),過長可能導(dǎo)致組織過硬,影響切片;過短則細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清。
  特殊情況:若需保留糖原等成分,可使用冷固定液(4℃);若組織含較多血液,可先用生理鹽水沖洗后再固定。
  二、組織處理(脫水、透明、包埋)
  脫水
  梯度乙醇脫水:依次經(jīng)70%、80%、95%(Ⅰ、Ⅱ)、100%(Ⅰ、Ⅱ)乙醇處理,每步時(shí)間根據(jù)組織大小調(diào)整(通常30~60分鐘),確保徹d脫去水分。
  避免跳過低濃度乙醇直接用高濃度,否則可能導(dǎo)致組織收縮、細(xì)胞變形(尤其肝血竇豐富,易受影響)。
  透明與浸蠟
  透明劑(如二甲苯)需新鮮,避免雜質(zhì)污染,透明時(shí)間適中(通常15~30分鐘),過長會使組織變脆,過短則蠟無法充分浸潤。
  浸蠟需在恒溫箱中進(jìn)行(60℃左右),使用熔點(diǎn)56~58℃的石蠟,分2~3次浸蠟(每次30~60分鐘),確保蠟完q取代透明劑,避免切片時(shí)出現(xiàn)空洞。
  包埋
  包埋時(shí)肝組織需放平,切面朝下,確保后續(xù)切片能完整顯示肝小葉結(jié)構(gòu)(中央靜脈、匯管區(qū)等關(guān)鍵區(qū)域)。
  包埋蠟塊需冷卻充分,避免蠟塊內(nèi)有氣泡,否則切片易碎裂。
  三、切片與貼片
  切片
  切片厚度控制在3~5μm(肝組織較柔軟,過厚易重疊,過薄易破碎),使用鋒利的切片刀或一次性刀片,避免刀痕。
  切片時(shí)保持蠟塊溫度穩(wěn)定(可使用恒溫切片機(jī)),防止組織皺縮或斷裂,尤其肝硬化組織因纖維化較硬,需調(diào)整切片角度和速度。
  貼片與烤片
  貼片前需清潔載玻片(避免油污影響?zhàn)じ剑墒褂枚嗑圪嚢彼峄駻PES處理載玻片,防止脫片。
  切片在45~50℃溫水浴中展平(水溫過高可能導(dǎo)致細(xì)胞脫落),輕輕撈取后瀝干水分,置于60~65℃烤箱中烤片2~4小時(shí)(或37℃過夜),徹d烘干水分,避免染色時(shí)脫片。
  四、染色過程
  脫蠟與水化
  二甲苯脫蠟需徹d(2次,每次5~10分鐘),后續(xù)經(jīng)梯度乙醇(100%、95%、80%、70%)水化至蒸餾水,每步1~3分鐘,避免脫蠟不凈導(dǎo)致染色不均。
  蘇木精染色
  蘇木精染液需新鮮(或過濾后使用),染色時(shí)間根據(jù)染液濃度和組織類型調(diào)整(通常5~10分鐘),肝細(xì)胞核應(yīng)染成深藍(lán)色,避免過染(導(dǎo)致核結(jié)構(gòu)模糊)或欠染(核不清)。
  分化步驟關(guān)鍵:用1%鹽酸乙醇分化數(shù)秒至數(shù)十秒,直至組織變?yōu)榈凵⒓从昧魉疀_洗返藍(lán)(10~15分鐘),確保核質(zhì)對比清晰。
  伊紅染色
  伊紅染液染色時(shí)間通常1~3分鐘,使肝細(xì)胞質(zhì)、結(jié)締組織等染成粉紅色,染色后經(jīng)梯度乙醇脫水(70%、80%、95%、100%),避免水分殘留導(dǎo)致褪色。
  透明與封片
  二甲苯透明需充分(2次,每次5分鐘),確保切片透明無霧狀。
  封片時(shí)使用中性樹膠,避免產(chǎn)生氣泡,蓋玻片需緩慢放下,防止擠壓組織,封片后平放晾干(或37℃烘干),避免樹膠流淌。
  五、質(zhì)控與存儲
  質(zhì)量控制
  染色后需鏡檢:肝小葉結(jié)構(gòu)完整,肝細(xì)胞、膽管、血管等形態(tài)清晰,核質(zhì)對比分明(核藍(lán)、質(zhì)紅),無皺縮、脫片、染色不均等問題。
  若出現(xiàn)異常(如脫片、染色過淺),需追溯原因(如烤片不充分、染液失效)并重新處理。
  標(biāo)本與切片存儲
  剩余肝組織標(biāo)本需在固定液中冷藏(4℃)保存,標(biāo)記清晰(編號、取材日期、患者信息等)。
  染色后的切片需避光、干燥存儲,避免陽光直射導(dǎo)致褪色,長期保存可使用密封盒防潮。
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