大鼠髓核細(xì)胞的原代培養(yǎng)總結(jié)會(huì)

2024年4月18日，周四，公司組織，由實(shí)驗(yàn)室主管劉博主導(dǎo)，實(shí)驗(yàn)室全體成員參與，對(duì)大鼠髓核細(xì)胞的原代培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，進(jìn)行了培訓(xùn)與交流。本次會(huì)議，主要針對(duì)小鼠骨髓源性巨噬細(xì)胞的種植模型，劉博就實(shí)驗(yàn)方法深入進(jìn)行了講解，實(shí)驗(yàn)室人員展開(kāi)激烈的討論。以下為討論內(nèi)容的總結(jié)：

1.脫臼法處死SD大鼠，剃毛，75%酒精浸泡5min。

2.從尾椎處剪開(kāi)皮膚，取出腰椎。用含2%雙抗的PBS沖洗3-5次。

3.分離椎節(jié)，切開(kāi)纖維環(huán)分離凝膠狀髓核，將凝膠狀髓核置于PBS中沖洗3次，去除血跡，剪碎髓核組織呈1mm3大小，移至離心管后加入5倍體積的1.5%Ⅱ型膠原酶，37℃搖床消化2h。

4.消化結(jié)束，20%FBS終止消化，100um濾網(wǎng)過(guò)濾，1000r/min離心5min，棄上清后DMEM/F12重懸，按1×105/ml接種于培養(yǎng)板，加入含1%雙抗和 15% FBS 的 DMEM/F12，置于37 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

5.4d后換液，以后每3天換液 1 次，細(xì)胞達(dá) 90% 融合后傳代。

本次會(huì)議，提升公司對(duì)小鼠骨髓源性巨噬細(xì)胞的種植模型的重要知識(shí)點(diǎn)的認(rèn)知，針對(duì)相關(guān)實(shí)驗(yàn)，更好的把控實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，提高了公司在這方面的經(jīng)驗(yàn)積累。