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      實時PCR實驗

      簡要描述:實時PCR實驗(real-time PCR),屬于定量PCR(Q-PCR)的一種,以一定時間內DNA的增幅量為基礎進行DNA的定量分析。定量方式包括定量和相對定量。可檢測mRNA,microRNA,lncRNA和DNA水平的基因拷貝數變化。

      • 更新時間:2022-12-22
      • 瀏覽次數:1122

      詳細介紹

      實時PCR實驗具體方法

      1.SYBRGreen法:

      在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。

      SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖

      PCR產物熔解曲線圖(單一峰圖表明PCR擴增產物的單一性)

      2.TaqMan探針法:

      探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成*同步。

      二、服務流程

      1、引物設計與合成
      2、DNA/RNA抽提
      3、反轉錄(針對RNA)
      4、上機定量分析
      三、客戶提供
      1、全血、組織或細胞。
      2、引物,或由豐核提供。
      3、基因信息:目的基因名稱、物種和序列(或GenBank Accession Number)。
      四、交付內容
      實驗報告:詳細操作步驟
      原始數據:溶解曲線圖,擴增曲線圖,ct值

      實時PCR實驗服務列表

      項目

      備注

      周期

      引物設計與合成

       

      3個工作日

      提取

      RNA提取、miRNA提取、DNA提取

      2個工作日

      反轉錄

       

      2個工作日

      qPCR反應

      SYBR Green方法,相對定量

      2個工作日

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