過表達慢病毒構建及包裝實驗

簡要描述：過表達慢病毒構建及包裝實驗：慢病毒（Lentivirus）載體是以 HIV-1 （人類免疫缺陷1型病毒）為基礎發展起來的基因治療載體。具有感染譜廣泛、可以有效感染分裂期和靜止期細胞、長期穩定表達外源基因等優點，因此成為導入外源基因的有力工具。現在慢病毒系統已經被廣泛應用到各種細胞系的基因過表達、RNA干擾、microRNA研究以及活體動物實驗中。

更新時間：2022-12-22
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1 、過表達慢病毒構建及包裝實驗特點：

1.1 直接包裝成為假病毒顆粒，對分裂和非分裂細胞均有感染作用，適合RNAi研究和體內實驗中難于轉染的細胞 (比如神經元細胞、干細胞或其它原代細胞)。

1.2 可以通過簡單方式，在短時間內獲得穩定表達特定基因的多種細胞株。

1.3 可用于基因敲除、基因**和轉基因動物研究。

1.4 無需轉染試劑，操作簡便。

1.5 可以根據客戶需要制備多種標記。

2、過表達慢病毒構建及包裝實驗原理：

慢病毒（Lentivirus）是逆轉錄病毒的一種。構建的siRNA / miRNA慢病毒載體，與化學合成的siRNA和基于瞬時表達載體構建的普通siRNA載體相比，一方面可以擴增替代瞬時表達載體使用，另一方面，Lentivirus-siRNA克隆經過慢病毒包裝系統包裝后，可用于感染依靠傳統轉染試劑難于轉染的細胞系如原代細胞、懸浮細胞和處于非分裂狀態的細胞，并且在感染后可以整合到受感染細胞的基因組，進行長時間的穩定表達。

3 、過表達慢病毒構建及包裝流程：

3.1 含有目的基因的慢病毒表達載體的構建和質粒純化提取。

注：客戶也可以提供構建好的重組慢病毒表達載體。

3.2 慢病毒表達載體與包裝系統共轉染病毒包裝細胞。

3.3 收集病毒液。

3.4 純化和濃縮病毒。

3.5 分裝、- 80 oC保存。

3.6 滴度測定及無菌檢測。

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