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腫瘤細胞凋亡

簡要描述：腫瘤細胞凋亡：細胞凋亡（apoptosis）指為維持內環境穩定，由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同，細胞凋亡不是一件被動的過程，而是主動過程，它涉及一系列基因的激活、表達以及調控等的作用，它并不是病理條件下，自體損傷的一種現象，而是為更好地適應生存環境而主動爭取的一種死亡過程。

更新時間：2022-12-23
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一、細胞凋亡的形態學檢測
1、光學顯微鏡和倒置顯微鏡
(1)未染色細胞:凋亡細胞的體積變小、變形,細胞膜完整但出現發泡現象,細胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細胞出現皺縮、變圓、脫落。
(2)染色細胞:常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細胞的染色質濃縮、邊緣化,核膜裂解、染色質分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形
2、熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡
一般以細胞核染色質的形態學改變為指標來評判細胞凋亡的進展情況。常用的DNA特異性染料有: HO 33342 (Hoechst 33342) , HO 33258(Hoechst 33258), DAPI。三種種染料與DNA的結合是非嵌入式的,主要結合在DNA的A-T堿基區。紫外光激發時發射明亮的藍色熒光。Hoechst是與DNA特異結合的活性染料，儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,使用時用PBS稀釋,終濃度為10 ug/ml。DAPI為半通透性,用于常規固定細胞的染色。儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度，使用終濃度-般為10 ug/ml。結果評判:細胞凋亡過程中細胞核染色質的形態學改變分為三期: I期的細胞核呈波紋狀( rippled )或呈折縫樣( creased ),部分染色質出現濃縮狀態 ; I a期細胞核的染色質高度凝聚、邊緣化;I b期的細胞核裂解為碎塊,產生凋亡小。

3、透射電子顯微鏡觀察
結果評判:凋亡細胞體積變小,細胞質濃縮。凋亡I期( pro-apoptosis nuclei )的細胞核內染色質高度盤繞,出現許多稱為氣穴現象( cavitations )的空泡結構 ; I a期細胞核的染色質高度凝聚、邊緣化;細胞凋亡的晚期,細胞核裂解為碎塊,產生凋亡小體。
二、磷脂酰絲氨酸外翻分析( Annexin V法)
磷脂酰絲氨酸( Phosphatidylserine, PS )正常位于細胞膜的內側,但在細胞凋亡的早期, PS可從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面,暴露在細胞外環境中。Annexin-V是一種分子量為35~ 36KD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白,能與PS高親和力特異性結合。將Annexin-V進行熒光素(FITC、PE )或biotin標記,以標記了的Annexin-V作為熒光探針,利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發生。

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