分離提取E15天胎鼠脊髓神經(jīng)元的原代細(xì)胞培訓(xùn)

我司已成功分離并培養(yǎng)E15天胎鼠脊髓神經(jīng)元的原代細(xì)胞培養(yǎng)，并對(duì)細(xì)胞平臺(tái)的人員進(jìn)行培訓(xùn)。

培訓(xùn)地點(diǎn)：會(huì)議室、細(xì)胞房

參與培訓(xùn)人員：細(xì)胞房技術(shù)人員

首先在會(huì)議室先講解以下基礎(chǔ)操作步驟

(1)75% (體積分?jǐn)?shù))酒精消毒孕鼠,在無菌條件下取出胎鼠,分離并切取脊髓,置于冷的無鈣、鎂的HBSS液的平皿中( 下置冰袋)。

(2)解剖顯微鏡無菌條件下仔細(xì)剝離脊膜及血管。

(3)用彈簧剪將脊髓剪成1cm3大小，消化液37℃消化15-20min，每五分鐘振蕩一次；

(4)去掉上清，加入終止液終止消化，吹打10-15次，不能有氣泡，收集上清，剩余組織再消化一次。

(5)4℃1000rpm離心10min，棄上清，加入種植液1重懸，培養(yǎng)箱內(nèi)差速貼壁30min；

(6)收集上清，臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)，按6*105cells/孔種入六孔板（種植液1），37℃，5%CO2，95%飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

(7)培養(yǎng)第二天，全換液更換為種植液2；

(8)培養(yǎng)第四天，半量換液加入5uM的阿糖胞苷，24h全量換液；

(9)之后每周換液兩次。

之后并在細(xì)胞房代領(lǐng)細(xì)胞平臺(tái)所有技術(shù)人員進(jìn)行實(shí)練操作。后續(xù)并將組織細(xì)胞平臺(tái)的每位技術(shù)人員將此技術(shù)熟練操作。