分離提取胎鼠大腦皮層神經元的原代細胞培訓

我司已成功分離并培養胎鼠大腦皮層神經元的原代細胞培養，并對細胞平臺的人員進行培訓。

培訓地點：會議室、細胞房

參與培訓人員：細胞房技術人員

首先在會議室先講解以下基礎操作步驟

(1)75% (體積分數)酒精消毒孕鼠,在無菌條件下取出胎鼠,分離并切取脊髓,置于冷的無鈣、鎂的HBSS液的平皿中( 下置冰袋)。

(2)解剖顯微鏡無菌條件下仔細剝大腦皮層。

(3)用彈簧剪將脊髓剪成1cm3大小，消化液37℃消化15-20min，每五分鐘振蕩一次；

(4)去掉上清，加入終止液終止消化，吹打10-15次，不能有氣泡，收集上清，剩余組織再消化一次。

(5)4℃1000rpm離心10min，棄上清，加入種植液1重懸，培養箱內差速貼壁30min；

(6)收集上清，臺盼藍染色計數，按6*105cells/孔種入六孔板（種植液1），37℃，5%CO2，95%飽和濕度的培養箱中培養；

(7)培養第二天，全換液更換為種植液2；

(8)培養第四天，半量換液加入5uM的阿糖胞苷，24h全量換液；

(9)之后每周換液兩次。

之后并在細胞房代領細胞平臺所有技術人員進行實練操作。后續并將組織細胞平臺的每位技術人員將此技術熟練操作。