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5-23
細胞黏附性是維持組織結構穩定的基本條件,也是細胞運動和發揮功能的調節因素,并且對細胞的增殖、分化有重要影響。通常可分為兩類,即細胞與細胞黏附和細胞與基質黏附。機體內許多細胞,如上皮細胞,需要牢固地定在某處發揮功能;另一些細胞,如白細胞,活躍運動,就需要不斷調節細胞黏附。細胞黏附性的改變在腫瘤轉移過程中也發揮著重要作用。體外測定細胞粘附性實驗方法的建立,為粘附分子的發現、細胞間粘附影響的研究提供了極為有效的方法。公司擁有專業的實驗室、先進的實驗設備和經驗豐富的科研技術人員。技術...
5-23
血管形成體外模型可分為細胞水平的增殖實驗、遷移實驗和管腔形成實驗,以及器官水平的人胎盤血管段培養模型和大鼠動脈環模型。目前通常所說的血管形成實驗是指管腔形成實驗。管腔形成反映毛細血管的早期過程,是體外檢查內皮細胞功能最完整的指標。血管形成過程中內皮細胞會形成細胞條索,然后形成管腔,體外在特定條件下如基質膠、膠原等培養時也能形成管腔。藥物通過抑制管腔形成或使形成的管腔斷裂來達到抑制血管形成的作用。借助計算機軟件計算小管數及小管之間的連接數及小管的長度和面積,可定量分析藥物對管腔...
5-23
熒光素酶報告基因系統是以熒光素(luciferin)為底物來檢測熒光素酶活性的一種報告系統。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的過程中,會發出生物熒光(bioluminescence)。然后可以通過熒光測定儀(化學發光儀)測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物發光體系,可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達。雙熒光素酶體系,即有兩種熒光素酶,比較常見的組合是螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶,螢火...
5-19
【實驗方法與步驟】(1)細胞凋亡的誘導:HeLa細胞常規傳代培養至對數生長期(見細胞傳代培養)。實驗組細胞加入順鉑溶液(生理鹽水配置)至終濃度為20μmo1/L,37℃,5%CO2條件下繼續培養。空白實驗對照加入等體積的生理鹽水,同樣條件繼續培養。24h后進行染色及形態學觀察。(2)胰酶消化細胞,將培養基上清及消化下來的細胞一同轉入離心管中600~800r/min離心10min。(3)吸去上清,用1mLPBS重懸細胞沉淀,并轉入1.5mL微量離心管中,600~800r/min...
5-19
微孔濾膜培養小室及雙室聯合培養系統(Transwell實驗):應用微孔濾膜培養小室,進行膠質瘤細胞與內皮細胞的聯合培養,可以更接近體內環境,模擬瘤細胞對血管內皮細胞的作用,濾膜上8μm的微孔可允許內皮細胞穿過到達膜的下面,這些穿越遷移的內皮細胞可粘附于膜的下面,通過計數濾膜下面的細胞可基本反映細胞的遷移情況。Transwell的基本原理是將Transwell小室放入培養板中,小室內稱為上室,培養板內稱為下室,上室內添加上層培養液,下室內添加下層培養液,上下層培養液以膜相隔。將...
5-19
一、實驗原理各種細胞操作,包括傳代、凍存和原代組織的分離,均能導致細胞死亡。為了確定群體細胞中的存活細胞數,可采用臺盼藍染料排斥實驗(Phillips1973)。正常的健康細胞能排斥染料,但細胞膜完整性喪失后臺盼藍可彌散入細胞內。染料排斥實驗是一種粗糙的估計細胞活力的方法,無法區別10%~20%的活力差異。除此之外,排斥染料的細胞有可能不貼壁或不能較長時問生存或繁殖。二、實驗方法1)胰蛋白酶處理細胞,無菌狀態下取0.5ml細胞用PBS稀釋至每毫升2X105~4X105。2)向...
5-19
一、細胞轉染細胞轉染是指將外源分子如DNA,RNA等導入真核細胞的技術。常規轉染技術可分為瞬時轉染和穩定轉染兩大類。本實驗室主要是質粒轉染、miRcroRNA轉染、慢病毒轉染、藥物轉染、多肽轉染等。二、miRcroRNA轉染(一)實驗材料及試劑六孔板、CO2培養箱、EP管、酒精燈等;無血清培養基、MEM-α或DMEM、RNA、lipofectamine2000、MSC細胞等。(二)實驗內容1當六孔板中MSC細胞密度達90%時,準備轉染,將無血清培養基、MEM-α或DMEM取出...